Interaction entre virus et cellule

Bonjour,

Pour l'interation d'une glycoprotéine virale avec une protéine cellulaire, on incube le virus et la cellule, et on veut faire une IP suivit d'un western blot.

Est-ce-que le virus restera lié à la cellule lors des lavages et autres manips ? Y'a-t-il moyen de stabiliser les interactions ?

Ce n'est pas de l'IP mais de la coIP.
Ensuite, tu n'incubes pas ton virus et ta cellule sinon, ton interaction ne résisterait pas à l'extraction des protéines que tu serais obligé de faire.
Tu fais dabord une extraction des protéines, et tu mets ensuite les protéines virales et les protéines cellulaires. en contact.
Tu rajoutes l'anticorps contre ta protéine, et fais une chromatographie d'affinité.

Lors du lavage, l'interation doit tenir si le lavage n'est pas trop violent.

Ensuite lors du WB, l'interaction est rompue, ce qui est normal.
En WB, on sépare les protéines.

Sinon, la technique ELISA, ça marche très bien aussi.

D'accord, merci beaucoup Antares. C'est bien plus clair comme ça !

Juste un truc : c'est quoi l'avantage de la technique ELISA par rapport à l'autre ?

J'ai eu un TD là-dessus mais je ne me rappelle plus des avantages et inconvénients de chaque technique.
L'ELISA est plus sensible que la coIP/WB
Tout ce que j'ai retenu est qu'aucune n'est vraiment supérieure à l'autre.


Sinon, en techniques pour démontrer des interactions protéine-protéine, j'ai oublié :
- Le double hybride
- Le far-Western

Si il y avait une méthode parfaite, cela se saurait.